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專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)111 年第 48 題單選題

分子檢驗用於核酸擴增的引子(primer),通常對於序列有許多的考量通則,才能符合特異性需求;避免偽陽性發生的做法,下列何者錯誤?

A引子的GC含量應控制在30~70%間
B應該避免形成引子雙體(primer-dimer)
C為提高特異性,primers最好出現連續4個G正確答案
Dreal time PCR的放大片段不要超過400bp
答案與詳解
C
正確答案
PCR引子設計通則:避免連續G/C重複(尤其4個以上G),否則易非特異結合產生偽陽性。C為錯誤敘述。

逐選項解析

A引子的GC含量應控制在30~70%間✕ 錯誤
GC含量控制在40~60%(30~70%為可接受範圍)是標準設計通則,可確保引子與模板穩定結合且Tm值適中,敘述正確。
B應該避免形成引子雙體(primer-dimer)✕ 錯誤
引子雙體(primer-dimer)是引子間互補配對形成,會消耗試劑並產生非目標產物,導致偽陽性,故應避免,敘述正確。
C為提高特異性,primers最好出現連續4個G✓ 正確
Dreal time PCR的放大片段不要超過400bp✕ 錯誤

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