專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）108 年第 63 題單選題
針對甲型海洋性貧血的分子檢驗方法，下列敘述何者錯誤？
A南方墨點式為早期主要的分子檢驗方法
BGap-PCR可用於偵測東南亞型與泰國型的甲型海洋性貧血
CHb CS與Hb QS型可利用PCR-RFLP法檢測之
DMseI限制酶可用於檢測是否具有Hb CS與Hb QS此兩種變異基因正確答案
D正確答案
甲型海洋性貧血分子檢驗：南方墨點為早期方法；Gap-PCR 偵測大片段缺失型（--SEA、--THAI）；點突變型 Hb CS、Hb QS 用 PCR-RFLP，但兩者所用限制酶不同——MseI 僅適用於 Hb CS，無法同時檢測 Hb QS。
為什麼答案是 D
錯誤關鍵在「同時檢測 CS 與 QS 兩者」。MseI 辨識序列為 T^TAA：Hb CS 的突變（α2 終止密碼 TAA→CAA）會破壞 MseI 切位，故 MseI 可用於 Hb CS 之 PCR-RFLP；但 Hb QS 為 codon 125 CTG→CCG 的錯義突變，未涉及 MseI 切位，須改用 MnlI、AvaII 等其他限制酶檢測。因此「MseI 可同時用於 CS 與 QS」此敘述錯誤。
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完整詳解
Pro · 無限重點 甲型海洋性貧血分子檢驗：南方墨點為早期方法；Gap-PCR 偵測大片段缺失型（--SEA、--THAI）；點突變型 Hb CS、Hb QS 用 PCR-RFLP，但兩者所用限制酶不同——MseI 僅適用於 Hb CS，無法同時檢測 Hb QS。
關鍵：Hb CS（α2 終止密碼 TAA→CAA）破壞 MseI（TTAA）切位 → 用 MseI 辨識；Hb QS（α2 codon 125 CTG→CCG，錯義突變）非 MseI 切位 → 須用其他限制酶（如 MnlI、AvaII）。D 將「同時檢測 CS 與 QS」綁在 MseI 上即為錯誤。
逐選項分析
A✕
南方墨點法（Southern blot）為早期偵測 α-globin 基因大片段缺失的主要分子方法，後來被 Gap-PCR 取代。敘述正確。
B✕
Gap-PCR 在缺失片段兩側設計引子，可偵測東南亞型（--SEA）、泰國型（--THAI）、菲律賓型（--FIL）、地中海型（--MED）及 -α3.7、-α4.2 等缺失。敘述正確。
C✕
Hb Constant Spring（CS）與 Hb Quong Sze（QS）皆屬 α2 基因點突變型，可利用 PCR 擴增後以限制酶切割（PCR-RFLP）來區分突變型與正常型。敘述正確（但兩者使用的限制酶不同）。
D✓ 正確
錯誤關鍵在「同時檢測 CS 與 QS 兩者」。MseI 辨識序列為 T^TAA：Hb CS 的突變（α2 終止密碼 TAA→CAA）會破壞 MseI 切位，故 MseI 可用於 Hb CS 之 PCR-RFLP；但 Hb QS 為 codon 125 CTG→CCG 的錯義突變，未涉及 MseI 切位，須改用 MnlI、AvaII 等其他限制酶檢測。因此「MseI 可同時用於 CS 與 QS」此敘述錯誤。
α-海洋性貧血分子檢驗方法與限制酶整理
| 突變類型 | 代表型別 | 檢測方法 | 對應限制酶 / 原理 |
|---|
| 大片段缺失 | --SEA、--THAI、--FIL、-α3.7、-α4.2 | Gap-PCR | 跨缺失斷點設計引子 |
| 點突變（終止密碼） | Hb CS（α2 TAA→CAA） | PCR-RFLP | MseI（T^TAA），突變破壞切位 |
| 點突變（錯義） | Hb QS（α2 codon125 CTG→CCG） | PCR-RFLP | MnlI 或 AvaII 等（非 MseI） |
| 早期通用方法 | 各型缺失 | Southern blot | 依 DNA 片段大小差異判讀 |
命題將「MseI」同時綁在 Hb CS 與 Hb QS 上。事實是 MseI 僅適用於 Hb CS（因 TAA 為其切位），但 Hb QS 屬不同位置的錯義突變，須改用其他限制酶。考生若只記「CS/QS 都用 PCR-RFLP」而沒記住對應酶種，會誤判 D 為正確。
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