專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）110 年第 55 題單選題
以序列特異性聚合酶連鎖反應（Sequence-specific primer-PCR）進行HLA分型時，下列何種引子的設計能區分出不同的等位基因？
A引子的5' 端要與等位基因（Allele）變異性位置（Polymorphic position）互補
B引子的3' 端要與等位基因（Allele）變異性位置（Polymorphic position）互補正確答案
C引子的5' 端要與等位基因（Allele）保留性位置（Conserved position）互補
D引子的3' 端要與等位基因（Allele）保留性位置（Conserved position）互補
B正確答案
SSP-PCR 分型關鍵：引子的 3' 端必須對應等位基因的多型性位置，因為 Taq 聚合酶無法延伸 3' 端錯配，有差異才能區分等位基因。
為什麼答案是 B
SSP-PCR 的核心原理：Taq 聚合酶缺乏 3'→5' 校對活性，一旦引子 3' 端與模板錯配，就無法有效延伸。將引子 3' 端設計在等位基因的多型性位置（polymorphic position），若等位基因不符則無法擴增，從而實現等位基因特異性分型。
考點：5'端錯配不影響延伸考點：3'端決定擴增特異性考點：保留區無分型能力考點：3'端對保留區無法分型
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