專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）110 年第 76 題單選題
國人常見的甲型海洋性貧血基因型中，最常見的是第16號染色體發生超過20kbs之大片段缺失片段的東南亞缺失型。可以設計引子在缺失片段的前後，再利用傳統的聚合酶連鎖反應進行檢驗即可；此種檢驗方法不適合用來進行羊膜穿刺之檢體的產前分子檢查，主要原因為何？
A羊膜穿刺過程中，容易遭到母血污染而導致檢驗出現偽陰性的結果正確答案
B羊膜穿刺所取得的檢體可抽出的總DNA量過少，無法檢測
C東南亞缺失型無法在胚胎時期檢查出
D此方法過程過於繁瑣，不適合臨床檢驗應用
A正確答案
東南亞缺失型甲型海洋性貧血用缺失前後引子做PCR，但羊膜穿刺檢體易受母血污染，導致正常母源DNA被放大而出現偽陰性。
為什麼答案是 A
羊膜穿刺取得的胎兒檢體常混入母體血液，母血為正常基因型，PCR會優先放大正常片段而掩蓋胎兒的缺失訊號，造成偽陰性結果，故此gap-PCR法不適合產前診斷。
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完整詳解
Pro · 無限重點 東南亞缺失型甲型海洋性貧血用缺失前後引子做PCR，但羊膜穿刺檢體易受母血污染，導致正常母源DNA被放大而出現偽陰性。
看到「羊膜穿刺」「PCR」「偽陰性」連結 → 母血污染是經典陷阱。
逐選項分析
A✓ 正確
羊膜穿刺取得的胎兒檢體常混入母體血液，母血為正常基因型，PCR會優先放大正常片段而掩蓋胎兒的缺失訊號，造成偽陰性結果，故此gap-PCR法不適合產前診斷。
B✕ 陷阱
羊水細胞或絨毛培養後可取得足量DNA，加上PCR本身只需微量模板即可放大，DNA量並非主要限制，故非正解。
C✕
東南亞缺失型為DNA層級的大片段缺失，在胚胎/胎兒時期即可由分子檢驗檢出，敘述錯誤。
D✕
gap-PCR操作相對簡便快速，已廣泛用於臨床篩檢，並非繁瑣到不適用，故非主因。
甲型海洋性貧血常見缺失型與檢測
| 缺失型 | 缺失基因數 | 檢測方法 | 產前注意 |
|---|
| 東南亞缺失型(--SEA) | 雙基因(>20kb) | gap-PCR(缺失前後引子) | 須防母血污染 |
| α3.7 / α4.2 | 單基因小缺失 | gap-PCR / multiplex PCR | 同上 |
| 非缺失型(點突變) | 0缺失 | ARMS-PCR / 定序 | 母血污染影響大 |
B選項利用「羊膜穿刺DNA量」誘導考生，但PCR對模板量需求極低，真正關鍵是母血(正常基因型)污染後被一併放大，使缺失型胎兒被誤判為正常，產生偽陰性。考點在污染來源而非DNA數量。
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