專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）110 年第 60 題單選題
以核酸增幅法檢測病原菌，下列何種方法需要使用RNase H？
ATranscription-mediated amplification（TMA）正確答案
BStrand displacement amplification（SDA）
CPolymerase chain reaction（PCR）
DCleavase-invader
A正確答案
TMA是以RNA為中間產物的等溫增幅法，反轉錄後需RNase H分解RNA:DNA混成體中的RNA股，故需用到RNase H。
為什麼答案是 A
TMA利用反轉錄酶與T7 RNA聚合酶進行等溫增幅。反轉錄後形成RNA:DNA雜合體，必須靠RNase H分解其中的RNA股，才能讓DNA合成第二股並由T7啟動轉錄大量複製RNA。RNase H是其核心酵素。
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完整詳解
Pro · 無限重點 TMA是以RNA為中間產物的等溫增幅法，反轉錄後需RNase H分解RNA:DNA混成體中的RNA股，故需用到RNase H。
看到「以RNA為中間產物」「反轉錄酶」的等溫增幅法（TMA/NASBA）→ 一定要RNase H分解RNA股。
逐選項分析
A✓ 正確
TMA利用反轉錄酶與T7 RNA聚合酶進行等溫增幅。反轉錄後形成RNA:DNA雜合體，必須靠RNase H分解其中的RNA股，才能讓DNA合成第二股並由T7啟動轉錄大量複製RNA。RNase H是其核心酵素。
B✕
SDA為等溫增幅法，使用限制酶切出缺口（nick）配合具股置換能力的DNA聚合酶進行擴增，依賴的是限制酶與exo-聚合酶，並不需要RNase H。
C✕
傳統PCR以耐熱DNA聚合酶（如Taq）配合熱循環變性/黏合/延伸，全程針對DNA模板，不涉及RNA中間產物，故不需RNase H。RT-PCR雖含反轉錄但仍非以RNase H為必要核心酵素。
D✕
Cleavase-invader（Invader assay）利用Cleavase（一種結構特異性核酸內切酶）辨識並切割侵入性探針所形成的重疊結構訊號放大，與RNase H無關。
常見核酸增幅法核心酵素比較
| 方法 | 溫度 | 模板/中間產物 | 核心酵素 |
|---|
| TMA/NASBA | 等溫 | RNA中間產物 | 反轉錄酶+T7聚合酶+RNase H |
| SDA | 等溫 | DNA | 限制酶+股置換聚合酶 |
| PCR | 熱循環 | DNA | 耐熱DNA聚合酶(Taq) |
| Invader | 等溫 | 目標核酸 | Cleavase結構特異核酸酶 |
考生易把所有等溫增幅法（TMA、SDA、NASBA、LAMP）混為一談。關鍵在於是否經由RNA:DNA雜合體：只有以RNA為中間產物的TMA/NASBA才需RNase H，SDA與PCR皆以DNA為主、與RNase H無關。
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