專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學110 年第 2 題單選題
下列何種化學試劑可以打斷蛋白質的雙硫鍵(Disulfide bonds),形成游離態的硫氫基(Free sulfhydryl groups)?
A重碳酸銨(Ammonium bicarbonate)
B溴化乙錠(Ethidium bromide)
Cβ-巰基乙醇(β-Mercaptoethanol)正確答案
D氯化鈉(Sodium chloride)
C正確答案
β-巰基乙醇是還原劑,能打斷蛋白質雙硫鍵(-S-S-)並產生游離硫氫基(-SH),是 SDS-PAGE 常用試劑。
為什麼答案是 C
β-巰基乙醇(2-mercaptoethanol)本身含游離 SH 基,是強還原劑,可將蛋白質的 -S-S- 雙硫鍵還原裂解成兩個游離的 -SH,是 SDS-PAGE 變性分析的標準試劑。
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完整詳解
Pro · 無限重點 β-巰基乙醇是還原劑,能打斷蛋白質雙硫鍵(-S-S-)並產生游離硫氫基(-SH),是 SDS-PAGE 常用試劑。
看到「打斷雙硫鍵」就找含 SH(硫氫基)的還原劑:β-Mercaptoethanol 或 DTT 直接選!
逐選項分析
A✕
重碳酸銨是常用的緩衝鹽類與揮發性緩衝液(質譜前處理常用),用於維持 pH,不具還原雙硫鍵的能力,無法產生游離硫氫基。
B✕ 陷阱
溴化乙錠(EtBr)是核酸嵌入染劑,用於 DNA/RNA 電泳染色,與蛋白質雙硫鍵完全無關。屬於分子生物學常見名詞陷阱。
C✓ 正確
β-巰基乙醇(2-mercaptoethanol)本身含游離 SH 基,是強還原劑,可將蛋白質的 -S-S- 雙硫鍵還原裂解成兩個游離的 -SH,是 SDS-PAGE 變性分析的標準試劑。
D✕
氯化鈉只是中性鹽類,影響離子強度與溶解度(如鹽析),不會還原雙硫鍵,無法產生游離硫氫基。
蛋白質雙硫鍵還原劑對照
| 試劑 | 功能 | 用途 | 可否還原-S-S- |
|---|
| β-巰基乙醇 (β-ME) | 還原劑(含SH) | SDS-PAGE樣品變性 | ✅ 可以 |
| DTT (二硫蘇糖醇) | 還原劑 | 更穩定還原雙硫鍵 | ✅ 可以 |
| 重碳酸銨 | 揮發性緩衝液 | 質譜前處理/維持pH | ❌ 不行 |
| 氯化鈉 | 中性鹽 | 調離子強度/鹽析 | ❌ 不行 |
本題把分子生物學常見試劑混在一起。溴化乙錠(B)名稱含「乙」「溴」易與處理蛋白質聯想,但它其實是核酸染劑。記住:要還原雙硫鍵必須選含 SH 基的還原劑(β-ME、DTT)。