專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學105 年第 52 題單選題
下列有關以ALT／LDH反應測定ALT活性的敘述，何者錯誤？
A加入過量的丙酮酸鹽以測得最大反應速率正確答案
B加入pyridoxal-5'-phosphate以確保ALT酵素的最大活性
C需要pre-incubation步驟以減少內源性oxo-acids的干擾
D加入過量的乳酸脫氫酶以確保ALT酵素的最大速率
A正確答案
ALT/LDH 偶聯法測 ALT 活性，需加過量 α-酮戊二酸（非丙酮酸），讓 ALT 受質飽和。
為什麼答案是 A
錯誤敘述（即本題答案）。ALT 反應為 alanine + α-ketoglutarate → pyruvate + glutamate，丙酮酸是『產物』非受質，應加過量 α-酮戊二酸與 alanine，而非過量丙酮酸鹽。
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完整詳解
Pro · 無限重點 ALT/LDH 偶聯法測 ALT 活性，需加過量 α-酮戊二酸（非丙酮酸），讓 ALT 受質飽和。
ALT 反應受質是 α-ketoglutarate + alanine，產物才是 pyruvate；加過量丙酮酸會反向抑制反應。
逐選項分析
A✓ 正確
錯誤敘述（即本題答案）。ALT 反應為 alanine + α-ketoglutarate → pyruvate + glutamate，丙酮酸是『產物』非受質，應加過量 α-酮戊二酸與 alanine，而非過量丙酮酸鹽。
B✕
正確。Pyridoxal-5'-phosphate (P5P, 維生素 B6 活性形式) 是 ALT 的輔酶，加入可活化 apo-ALT，確保測得的是總 ALT 活性。
C✕
正確。檢體中內源性 pyruvate 等 oxo-acids 會被 LDH 立即消耗 NADH 造成偽高值，pre-incubation 可先讓 LDH 清除這些干擾物再啟動反應。
D✕
正確。LDH 為指示酵素，將 ALT 產生的 pyruvate 還原為 lactate 同時氧化 NADH→NAD⁺，加入過量 LDH 確保此偶聯反應不成為速率限制步驟，反映真正的 ALT 活性。
ALT/LDH 偶聯反應測定原理
| 步驟 | 反應 | 試劑要求 | 目的 |
|---|
| 主反應 (ALT) | Ala + α-KG → Pyr + Glu | 受質過量、加 P5P | 測 ALT 活性 |
| 指示反應 (LDH) | Pyr + NADH → Lac + NAD⁺ | LDH 過量、NADH 過量 | 在 340 nm 監測 NADH 下降 |
| 預孵育 | 清除內源 oxo-acids | pre-incubation | 排除偽陽性 |
| 陷阱 | 丙酮酸是『產物』 | 加過量會反向抑制 | 本題 A 錯誤點 |
命題者把『丙酮酸（產物）』與『α-酮戊二酸（受質）』偷換。考生若只記得 ALT 反應與丙酮酸有關，就容易忽略丙酮酸是『產物』而非『受質』，依酵素動力學原理應使受質過量才能測得 Vmax。 
