專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學105 年第 27 題單選題
逆相層析（reversed-phase chromatography）是屬於下列那一類的層析法？
Aadsorption
Baffinity
Cmolecular-sieve
Dpartition正確答案
D正確答案
逆相層析利用待測物在非極性固定相與極性流動相之間的分配差異，屬於分配層析(partition)。
為什麼答案是 D
逆相層析以非極性物質(如C18)為固定相、極性溶劑(水/甲醇/乙腈)為流動相，依分配係數差異分離，屬於分配層析(partition chromatography)。
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完整詳解
Pro · 無限重點 逆相層析利用待測物在非極性固定相與極性流動相之間的分配差異，屬於分配層析(partition)。
看到 reversed-phase 直接想 partition！正相/逆相都是 partition 的子類，差別在固定相極性。
逐選項分析
A✕ 陷阱
吸附層析利用固體吸附劑(如矽膠、氧化鋁)對溶質的吸附力差異分離，與逆相層析機制不同。考生易因「都用矽膠」而混淆。
B✕
親和層析利用生物分子間特異性結合(如酵素-受質、抗原-抗體)分離，常見於蛋白質純化，與逆相無關。
C✕
分子篩層析(膠體過濾)依分子大小分離，大分子先洗出、小分子後洗出，與極性無關。
D✓ 正確
逆相層析以非極性物質(如C18)為固定相、極性溶劑(水/甲醇/乙腈)為流動相，依分配係數差異分離，屬於分配層析(partition chromatography)。
層析法分類速記
| 類型 | 分離原理 | 代表方法 | 應用 |
|---|
| Adsorption | 固相吸附力差異 | TLC、矽膠管柱 | 小分子分離 |
| Partition | 兩相分配係數差異 | 正相/逆相 HPLC | 藥物、代謝物 |
| Molecular-sieve | 分子大小差異 | Sephadex、Sepharose | 蛋白質脫鹽、分子量測定 |
| Affinity | 特異性生物結合 | His-tag、抗體管柱 | 蛋白質純化 |
| Ion-exchange | 電荷差異 | DEAE、CM 管柱 | 蛋白質、胺基酸 |
最常見錯誤是把逆相層析誤認為 adsorption(吸附)，因為都常用矽膠基質。但逆相層析的分離原理是溶質在兩相間「分配」而非「吸附」，且 C18 固定相是鍵結相非吸附劑，務必記住 reversed-phase = partition。 
