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專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)109 年第 70 題單選題考點:需先做PCR考點:非片段長度

變性高效能液相層析法能有效檢測因核苷酸單點突變造成的遺傳疾病,例如海洋性貧血。對於此方法的相關敘述,下列何者正確?

A此檢測方法不需要進行聚合酶連鎖反應放大欲檢測的基因片段
B其原理是雙股DNA(duplex DNA)片段長度與層析管柱的親和力成正比
C雙股DNA中若有錯配的核苷酸,會降低其與層析管柱的親和力正確答案
D進行變性高效能液相層析法時,層析管柱的溫度須保持恆定
答案與詳解
C
正確答案
DHPLC 檢測單點突變原理:錯配(mismatch)的異質雙股 DNA 較不穩定,與管柱親和力降低、較早洗脫出來。

逐選項解析

A此檢測方法不需要進行聚合酶連鎖反應放大欲檢測的基因片段需先做PCR✕ 錯誤
DHPLC 必須先以 PCR 放大目標基因片段,再將正常與待測股變性、重新黏合形成異質雙股(heteroduplex),才能上機分析。沒有 PCR 就沒有足夠的 DNA 量可供層析偵測。
B其原理是雙股DNA(duplex DNA)片段長度與層析管柱的親和力成正比非片段長度✕ 易錯陷阱
DHPLC 區分的是同質雙股(homoduplex)與異質雙股(heteroduplex)在部分變性下的穩定性差異,而非單純片段長度。同樣長度的片段若含錯配仍會被分開,故與片段長度成正比的說法錯誤。
C雙股DNA中若有錯配的核苷酸,會降低其與層析管柱的親和力✓ 正確
D進行變性高效能液相層析法時,層析管柱的溫度須保持恆定✕ 錯誤

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