專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)109 年第 70 題單選題
變性高效能液相層析法能有效檢測因核苷酸單點突變造成的遺傳疾病,例如海洋性貧血。對於此方法的相關敘述,下列何者正確?
A此檢測方法不需要進行聚合酶連鎖反應放大欲檢測的基因片段
B其原理是雙股DNA(duplex DNA)片段長度與層析管柱的親和力成正比
C雙股DNA中若有錯配的核苷酸,會降低其與層析管柱的親和力正確答案
D進行變性高效能液相層析法時,層析管柱的溫度須保持恆定
C正確答案
DHPLC 檢測單點突變原理:錯配(mismatch)的異質雙股 DNA 較不穩定,與管柱親和力降低、較早洗脫出來。
為什麼答案是 C
正確。含錯配核苷酸的異質雙股 DNA 在部分變性溫度下較易解開、較不穩定,與疏水性管柱(離子對試劑)親和力降低,因此提早被洗脫,出現與正常同質雙股不同的層析峰,據此偵測突變。
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完整詳解
Pro · 無限重點 DHPLC 檢測單點突變原理:錯配(mismatch)的異質雙股 DNA 較不穩定,與管柱親和力降低、較早洗脫出來。
記關鍵字:mismatch(錯配)→ 雙股穩定性下降 → 親和力降低 → 提早出峰。選 C。
逐選項分析
A✕
DHPLC 必須先以 PCR 放大目標基因片段,再將正常與待測股變性、重新黏合形成異質雙股(heteroduplex),才能上機分析。沒有 PCR 就沒有足夠的 DNA 量可供層析偵測。
B✕ 陷阱
DHPLC 區分的是同質雙股(homoduplex)與異質雙股(heteroduplex)在部分變性下的穩定性差異,而非單純片段長度。同樣長度的片段若含錯配仍會被分開,故與片段長度成正比的說法錯誤。
C✓ 正確
正確。含錯配核苷酸的異質雙股 DNA 在部分變性溫度下較易解開、較不穩定,與疏水性管柱(離子對試劑)親和力降低,因此提早被洗脫,出現與正常同質雙股不同的層析峰,據此偵測突變。
D✕
DHPLC 的核心在於精確控制部分變性溫度(partial denaturation),溫度需依片段熔解特性調整、並非保持恆定。正是利用特定溫度下異質雙股與同質雙股穩定性的差異來區分突變。
DHPLC 檢測單點突變要點
| 步驟/特性 | 內容 | 目的 |
|---|
| 前置作業 | PCR 放大目標片段 | 提供足量 DNA |
| 關鍵反應 | 變性後再黏合形成 heteroduplex | 讓錯配呈現 |
| 分離原理 | 錯配降低雙股穩定性與親和力 | 提早洗脫 |
| 溫度控制 | 部分變性溫度(非恆定) | 凸顯穩定性差異 |
B、C 互為陷阱對照組。許多考生誤以為層析是看「片段長度」(B),但 DHPLC 看的是錯配造成的雙股穩定性差異。D 則偷換成「溫度恆定」,實際上 DHPLC 精髓正是精準控制部分變性溫度。
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