專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）109 年第 45 題單選題
以單一鹼基延長作用（Single base extension, SBE）來偵測single nucleotide polymorphism（SNP），SNP所在的位置是：
ASBE primer 5' 端第一個核苷酸
BSBE primer 3' 端最後一個核苷酸
C不存在SBE primer序列中，是緊接SBE primer 3' 端後第一個核苷酸正確答案
D不存在SBE primer序列中，是緊接SBE primer 5' 端前第一個核苷酸
C正確答案
SBE的primer 3'端剛好停在SNP前一個鹼基，延長加入的第一個ddNTP才是SNP位置。
為什麼答案是 C
正解。SBE引子設計使3'端緊鄰SNP，加入螢光標記ddNTP後只延長一個鹼基，該鹼基即SNP位置，不在原引子序列中，緊接3'端之後。
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完整詳解
Pro · 無限重點 SBE的primer 3'端剛好停在SNP前一個鹼基，延長加入的第一個ddNTP才是SNP位置。
記口訣：SBE引子3'端對齊SNP前一格，延長那一格就是SNP，不在primer內。
逐選項分析
A✕
SBE引子的5'端是固定錨定端，與延長反應無關，SNP不可能在此位置。延長作用發生在3'端，方向錯誤。
B✕ 陷阱
引子3'端最後一個核苷酸是與SNP前一鹼基互補的位置，並非SNP本身。SNP在延長加入的下一個鹼基，易混淆此處。
C✓ 正確
正解。SBE引子設計使3'端緊鄰SNP，加入螢光標記ddNTP後只延長一個鹼基，該鹼基即SNP位置，不在原引子序列中，緊接3'端之後。
D✕
5'端方向不進行延長反應，緊接5'端前的位置不會被聚合酶加入鹼基，與SBE偵測機制不符。
SBE（單一鹼基延長）原理速記
| 要素 | 說明 |
|---|
| 引子3'端 | 緊鄰SNP前一個鹼基（不含SNP） |
| 延長反應 | 加入一個ddNTP，反應終止 |
| SNP位置 | 緊接primer 3'端後第一個核苷酸 |
| 偵測 | 螢光標記ddNTP判讀基因型 |
考生易誤以為SNP在引子內的3'端最後一格（B）。事實上SBE引子刻意停在SNP前一格，延長作用加入的那一個鹼基才是SNP，因此SNP位於引子序列之外、緊接3'端後第一個位置。
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