專技高考-醫事檢驗師 109 年 · 第 75 題 專技高考-醫事檢驗師 醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學） 109 年 第 75 題 單選題
EML4（Echinoderm Microtubule Associated Protein Like 4）與ALK（Anaplastic lymphoma kinase）之融合基因（EML4-ALK fusion gene）是肺腺癌中常見的一種染色體轉位（translocation）變異，下列何種方法最不適用在檢測此種變異或其蛋白產物？ A 螢光原位雜交（FISH）
B RNA反轉錄後進行聚合酶連鎖反應（RT-PCR）
C 免疫組織化學染色法（IHC）
D DNA桑格定序法（Sanger sequencing） 正確答案
D 正確答案
EML4-ALK融合基因的斷裂點在內含子（intron）區域變異大，Sanger定序需設計引子鎖定特定序列，無法涵蓋多變的斷裂位置，故最不適用。
為什麼答案是 D Sanger定序需事先設計引子、適合偵測已知位置的點突變或小片段變異。EML4-ALK的斷裂點落在很長的intron區、位置多變，定序範圍與通量都不足以涵蓋，故最不適用。
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完整詳解 Pro · 無限 重點 EML4-ALK融合基因的斷裂點在內含子（intron）區域變異大，Sanger定序需設計引子鎖定特定序列，無法涵蓋多變的斷裂位置，故最不適用。
問「融合基因」檢測誰最弱→Sanger要先知道斷裂點且範圍小，遇到大範圍intron斷裂就GG。
逐選項分析 A ✕
FISH用兩色探針標記ALK基因兩端，發生轉位融合時訊號分離（break-apart probe），可直接在染色體層級偵測ALK重排，是臨床檢測EML4-ALK的金標準之一。
B ✕
RT-PCR先把mRNA反轉錄成cDNA，融合後的轉錄產物會把EML4與ALK外顯子直接接在一起，引子跨融合接點即可專一擴增，可有效偵測融合轉錄本。
C ✕
IHC利用抗ALK抗體偵測融合蛋白的異常表現，正常肺組織不表現ALK，融合後則高度表現，可作為快速篩檢蛋白產物的工具。
D ✓ 正確
Sanger定序需事先設計引子、適合偵測已知位置的點突變或小片段變異。EML4-ALK的斷裂點落在很長的intron區、位置多變，定序範圍與通量都不足以涵蓋，故最不適用。
EML4-ALK融合基因檢測方法比較 方法 偵測對象 層級 適用性 FISH ALK基因重排 DNA/染色體 金標準 RT-PCR 融合mRNA轉錄本 RNA 高靈敏 IHC 融合蛋白表現 蛋白 快速篩檢 Sanger定序 已知小片段序列 DNA序列 最不適用
Sanger定序確實能讀DNA序列，但融合基因的斷裂點分散在大範圍intron內、位置不固定，引子無法事先鎖定，導致無法有效偵測。考生若只想「定序最準」就會誤選，重點在於斷裂點變異大、Sanger通量與範圍不足。
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