專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學113 年第 1 題單選題
若要分離 Pro-Ser-Val-Ala-Ile 與 Asn-Ala-Thr-Ser-Pro 兩條胜肽（peptide），使用下列那種方法最為合適？
Asize-exclusion chromatography
Bion-exchange chromatography
CAffinity chromatography
Dreversed-phase liquid chromatography正確答案
D正確答案
兩條胜肽長度相同（5個胺基酸）、胺基酸組成都是中性，差別在疏水性，故用反相層析最合適。
為什麼答案是 D
reversed-phase依疏水性分離。Pro-Ser-Val-Ala-Ile含Val、Ile等強疏水殘基，疏水性明顯高於含Asn、Thr的另一條，疏水性差異大，反相層析能有效分開。
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完整詳解
Pro · 無限重點 兩條胜肽長度相同（5個胺基酸）、胺基酸組成都是中性，差別在疏水性，故用反相層析最合適。
先看兩條胜肽差在哪：大小一樣→排除排阻；都中性無帶電差→排除離子交換；無特異配體→排除親和。剩疏水性差→反相。
逐選項分析
A✕ 陷阱
size-exclusion（凝膠過濾）依分子大小分離，但兩條都是5胺基酸的胜肽，分子量幾乎相同，無法分開，故不適合。
B✕ 陷阱
ion-exchange依淨電荷分離。兩條胜肽的胺基酸（Pro、Ser、Val、Ala、Ile、Asn、Thr）均為中性側鏈，無酸鹼性殘基，淨電荷差異不大，分離效果差。
C✕
Affinity層析需有專一性結合配體（如抗體、酵素受質）。這兩條普通胜肽無特定結合對象，無法用親和法分離。
D✓ 正確
reversed-phase依疏水性分離。Pro-Ser-Val-Ala-Ile含Val、Ile等強疏水殘基，疏水性明顯高於含Asn、Thr的另一條，疏水性差異大，反相層析能有效分開。
蛋白質/胜肽層析法分離依據
| 方法 | 分離依據 | 適用情境 |
|---|
| Size-exclusion | 分子大小 | 大小差異明顯時 |
| Ion-exchange | 淨電荷 | 帶電性質不同時 |
| Affinity | 專一性結合 | 有特異配體時 |
| Reversed-phase | 疏水性 | 疏水性差異明顯時 |
解題關鍵是『找差異』。兩條胜肽大小相同、電荷相近，這正好排除排阻與離子交換層析。必須抓出唯一明顯不同的性質——疏水性（一條含Val/Ile強疏水殘基，另一條含Asn/Thr親水殘基），才知道選反相層析。 
