專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)107 年第 57 題單選題
有關原位螢光雜交法(Fluorescent in situ hybridization; FISH)鑑定細菌菌種之敘述,下列何者錯誤?
A檢測敏感度約在 $10^{5} \mathrm{CFU} / \mathrm{ml}$
B可直接用於檢測檢體
C可檢測檢體中的DNA或RNA
D雜交反應是使用有標幟螢光的雙股DNA探針正確答案
D正確答案
FISH 使用「單股」DNA 或 RNA 探針與目標核酸雜交,雙股探針無法直接結合目標序列。
為什麼答案是 D
錯誤!FISH 使用的是「單股」DNA(或 PNA)螢光標幟探針,才能與變性後的目標單股核酸互補配對。雙股探針無法雜交,這是本題陷阱。
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完整詳解
Pro · 無限重點 FISH 使用「單股」DNA 或 RNA 探針與目標核酸雜交,雙股探針無法直接結合目標序列。
雜交(hybridization)= 互補單股結合,看到「雙股探針」直接刪。
逐選項分析
A✕
FISH 偵測極限約 10⁵ CFU/ml,屬於敏感度中等的分子檢測方法,敘述正確。
B✕
FISH 可直接應用於臨床檢體(如血液培養、組織切片、痰液),不需先培養出純菌落,是其臨床優勢。
C✕
探針可針對 DNA 或 rRNA(特別是 16S/23S rRNA)設計,因 rRNA 在細菌內拷貝數高,常作為主要靶標,敘述正確。
D✓ 正確
錯誤!FISH 使用的是「單股」DNA(或 PNA)螢光標幟探針,才能與變性後的目標單股核酸互補配對。雙股探針無法雜交,這是本題陷阱。
FISH 關鍵特性整理
| 項目 | 內容 | 重點 | 考點 |
|---|
| 探針類型 | 單股 DNA / PNA | 必須單股才能雜交 | ★★★ |
| 螢光標幟 | FITC、Cy3、Texas Red 等 | 可多色辨識多菌種 | ★★ |
| 靶標 | 16S/23S rRNA 為主,亦可 DNA | rRNA 拷貝數高訊號強 | ★★★ |
| 敏感度 | 約 10⁵ CFU/ml | 需有一定菌量 | ★★ |
| 優勢 | 直接用於臨床檢體 | 省去培養時間 | ★★★ |
出題者把「雙股 DNA 探針」放在 D,誘導考生忽略「雜交反應前提是單股互補」。記住雜交(hybridization)= 兩條互補單股結合,所以探針必須是單股,這是分子檢測的鐵律。
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