專技高考-醫事檢驗師生物化學與臨床生化學104 年第 39 題單選題
下列有關定量蛋白質之biuret反應的敘述，何者正確？
A將緩衝液pH值降低，可促使蛋白質與藍色染劑之結合
B銅離子可與蛋白質中的胜肽鍵結合正確答案
C利用折射法定量
D利用酸性溶液將蛋白質沉澱
B正確答案
Biuret 反應原理：鹼性溶液中，Cu²⁺ 與蛋白質胜肽鍵（-CO-NH-）配位形成紫色錯合物，吸光度與蛋白質濃度成正比。
為什麼答案是 B
正解。Biuret 反應的核心機制：在鹼性條件下，Cu²⁺ 與蛋白質中至少兩個以上的胜肽鍵（peptide bond）的氮原子配位，形成紫色錯合物，於 540nm 測吸光度進行定量。
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完整詳解
Pro · 無限重點 Biuret 反應原理：鹼性溶液中，Cu²⁺ 與蛋白質胜肽鍵（-CO-NH-）配位形成紫色錯合物，吸光度與蛋白質濃度成正比。
看到「biuret」直接想：鹼性 + 銅離子 + 胜肽鍵 + 紫色 + 540nm 比色法。四要素缺一不可。
逐選項分析
A✕ 陷阱
Biuret 反應需要在「鹼性」環境下進行（含 NaOH），降低 pH 反而會破壞反應。且 biuret 不是用「藍色染劑結合」原理，而是 Cu²⁺ 與胜肽鍵配位產生紫色錯合物。此選項是與 Bradford 法（藍色 Coomassie 染劑）混淆。
B✓ 正確
正解。Biuret 反應的核心機制：在鹼性條件下，Cu²⁺ 與蛋白質中至少兩個以上的胜肽鍵（peptide bond）的氮原子配位，形成紫色錯合物，於 540nm 測吸光度進行定量。
C✕
Biuret 反應屬「比色法（colorimetry）」，利用紫色錯合物在 540nm 的吸光度定量，而非折射法。折射法（refractometry）多用於血清總蛋白快速估測或尿比重，原理完全不同。
D✕ 陷阱
Biuret 是在「鹼性」溶液（NaOH）中進行，並非酸性沉澱。利用酸性溶液（如 TCA、磺基水楊酸）使蛋白質沉澱屬於「沉澱比濁法（turbidimetry）」，是不同的定量方法。
蛋白質定量方法比較
| 方法 | 原理/試劑 | 偵測波長 | 敏感度 |
|---|
| Biuret | 鹼性 Cu²⁺ + 胜肽鍵 → 紫色 | 540 nm | 低（mg 級） |
| Lowry | Biuret + Folin 試劑 | 750 nm | 中（μg 級） |
| Bradford | Coomassie 藍染劑與蛋白結合 | 595 nm | 高（μg 級） |
| BCA | Cu⁺ + BCA → 紫色 | 562 nm | 高（μg 級） |
| UV 法 | 芳香族胺基酸吸光 | 280 nm | 中 |
本題最大陷阱是 A 選項把「Bradford 法（藍色染劑、酸性）」的特徵塞進「Biuret 反應」的敘述中混淆考生。記住：Biuret = 鹼性 + 銅 + 紫色；Bradford = 酸性 + 染劑 + 藍變色。兩者方向完全相反。 
