專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學（包括寄生蟲學）110 年第 70 題單選題
表觀遺傳（epigenetic modification），尤其是DNA甲基化（methylation），已被列為急性骨髓性白血病染色體及基因變異的五大類項之一。下列何種試藥可以將未被甲基化的胞嘧啶(C)轉變成尿嘧啶(U)，而使用於分析甲基化的分子檢驗中？
A二甲基亞硫（DMSO）
B乙二胺四乙酸（EDTA）
C二乙基亞硝胺（DEN）
D重亞硫酸鹽（bisulfite）正確答案
D正確答案
重亞硫酸鹽（bisulfite）能將未甲基化的胞嘧啶(C)轉成尿嘧啶(U)，甲基化的C則不變，是DNA甲基化分析的關鍵試劑。
為什麼答案是 D
重亞硫酸鹽（bisulfite）能將未甲基化的胞嘧啶去胺基轉成尿嘧啶(U)，而5-甲基胞嘧啶不受影響，PCR後讀為C，藉此區分甲基化狀態，為bisulfite sequencing核心原理。
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完整詳解
Pro · 無限重點 重亞硫酸鹽（bisulfite）能將未甲基化的胞嘧啶(C)轉成尿嘧啶(U)，甲基化的C則不變，是DNA甲基化分析的關鍵試劑。
看到「甲基化分析」「C轉U」直接選bisulfite，這是甲基化定序的經典前處理。
逐選項分析
A✕ 陷阱
DMSO（二甲基亞碸）常作為PCR反應的助溶劑、降低GC區域二級結構，並非用於C轉U的甲基化轉換試劑，屬干擾選項。
B✕
EDTA為螯合劑，可結合二價金屬離子（如Mg2+）抑制核酸酶活性，常用於保存DNA與抗凝，與甲基化轉換無關。
C✕
DEN（二乙基亞硝胺）是已知的致癌物與肝癌誘導劑，並非分子檢驗中用於C轉U的試藥，屬無關選項。
D✓ 正確
重亞硫酸鹽（bisulfite）能將未甲基化的胞嘧啶去胺基轉成尿嘧啶(U)，而5-甲基胞嘧啶不受影響，PCR後讀為C，藉此區分甲基化狀態，為bisulfite sequencing核心原理。
Bisulfite 轉換原理
| 核苷酸狀態 | bisulfite處理後 | 定序讀取結果 |
|---|
| 未甲基化 C | 去胺基→尿嘧啶(U) | 讀為 T |
| 甲基化 5-mC | 不受影響 | 讀為 C |
DMSO常見於PCR反應而易被誤選，但它只是助溶劑，無化學修飾C的功能。真正能將未甲基化C去胺基轉成U的是bisulfite，須牢記其專一性轉換特性。
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