專技高考-醫事檢驗師醫學分子檢驗學與臨床鏡檢學(包括寄生蟲學)110 年第 43 題單選題
下列關於異源雜合雙鏈分析法(Heteroduplex analysis)的敘述,何者錯誤?
A利用溶液雜交(Solution hybridization)
B偵測點突變
C需要與參考(Reference)DNA混合加熱
D加熱後要迅速降溫正確答案
D正確答案
異源雜合雙鏈分析需「緩慢降溫」讓DNA重新黏合形成異源雙鏈,迅速降溫會破壞雜交,故D錯誤。
為什麼答案是 D
錯誤敘述。加熱變性後應「緩慢降溫」使兩股DNA重新退火配對形成異源雙鏈;若迅速降溫則無法有效雜交,無法形成可分析的異源雙鏈,故D錯誤,為本題答案。
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完整詳解
Pro · 無限重點 異源雜合雙鏈分析需「緩慢降溫」讓DNA重新黏合形成異源雙鏈,迅速降溫會破壞雜交,故D錯誤。
凡是涉及「雜交/退火(annealing)」的步驟,原則都要「緩慢降溫」促進配對,看到「迅速降溫」就要警覺。
逐選項分析
A✕
異源雜合雙鏈分析確實是在溶液中進行雜交(Solution hybridization),將樣本DNA與參考DNA變性後重新黏合,敘述正確。
B✕
此法主要用於偵測點突變、小片段插入或缺失,因錯配處形成的氣泡(bubble)會改變電泳遷移率,敘述正確。
C✕
需將待測DNA與已知序列的參考(wild-type/reference)DNA混合並加熱變性,才能在降溫時重新形成同源與異源雙鏈,敘述正確。
D✓ 正確
錯誤敘述。加熱變性後應「緩慢降溫」使兩股DNA重新退火配對形成異源雙鏈;若迅速降溫則無法有效雜交,無法形成可分析的異源雙鏈,故D錯誤,為本題答案。
異源雜合雙鏈分析(Heteroduplex Analysis)重點
| 項目 | 說明 |
|---|
| 原理 | 錯配處形成氣泡,改變電泳遷移率 |
| 反應方式 | 溶液中雜交(變性後退火) |
| 關鍵步驟 | 加熱變性→緩慢降溫退火 |
| 應用 | 偵測點突變、小片段插入/缺失 |
本題把SSCP(單股構型多態性)常用的「迅速降溫保持單股」誤植到需要雜交的異源雙鏈分析。異源雙鏈分析需緩慢降溫讓DNA配對,迅速降溫反而破壞雜交,是經典的步驟順序/降溫方式混淆陷阱。
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